体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名 称：脑炎/脑膜炎多重病原体核酸联合检测 试剂盒（封闭巢式多重 PCR 熔解曲线法） 

产品英文（原文）名称：FilmArray? Meningitis/Encephalitis (ME) Panel 

产品管理类 别：第三类 

申 请 人 名 称：拜奥法尔诊断有限责任公司 BioFire Diagnostics, LLC 

国家药品监督管理局

医疗器械审评中心

基本信息

 一、申请人名称 

拜奥法尔诊断有限责任公司BioFire Diagnostics, LLC 

二、申请╱人住所 

515 Colorow Drive, Salt Lake City, Utah 84108, USA 

三、生产地址 

515 Colorow Drive, Salt Lake City, Utah 84108, USA

技术审评概述 

一、产品概述 

（一）产品主要组成成分 本试剂盒包含以下组分，主要组成成分见表 1。 

表 1 试剂盒主要组成成分

（二）产品预期用途 

本产品用于体外定性检测具有脑膜炎及/或脑炎体征及/或症 状的人群的脑脊液 (CSF)样本中的 14 种细菌、病毒和〗酵母菌的核 酸。包括：大肠埃希菌 K1 株、流♀感嗜血杆菌、单核细胞增生李 斯特菌、脑膜◎炎奈瑟菌（有荚膜）、无乳∴链球菌↘、肺炎链¤球菌； 巨细胞病毒、肠道病毒、单纯疱疹Ψ 病毒 1 型、单纯疱疹病毒 2 型、 人疱疹病毒6 型、人★双埃可病毒、水痘-带状疱疹病々毒；新型隐球 菌（新生/格特）

中枢神经系统（CNS）感染是引发脑及/或脑周围的脑膜组 织炎症（即脑炎、脑膜脑炎；在此统称为 ME）的原因。约有 15% 的感染具有致死性，而其他可能会】导致终身残疾，例如截肢、视 力和№听力缺陷、癫痫和学习/记忆功能异常。本产品可用于从脑 脊液（CSF）中检测鉴定出 14 种潜在中枢神经系统感染相々关病原 体。可在大约一小时左≡右通过本产品检测获得所测◤样本的结果。 本产品是诊断脑膜炎及/或脑炎相关的病原体的一种辅助手 段，所得检测结果应结合其他临床、流行←病学和实验室数据使用。 检测█的结果不应用作诊断、治疗或其他患者处置决策的卐唯一依据。 阳性结果不能排除与产品未涵盖的微生物存在共感染的情况。检 测到的病原体不一定是疾病的明确病因。阴性结果并不能排除中 枢神经系统（CNS）感染。 

（三）产品包装规格 

货号（RFIT-ASY-0118）：30 测试/盒;

 货号（RFIT-ASY-0119）：6 测试/盒。

（四）产ㄨ品检验原理 

本产品采用多重巢式 PCR 扩增并结合熔解曲线分析↙，对通 过腰椎穿刺获得的脑脊液样本中的上述 14 种病原体核酸进行检 测。 

产品是一种一次性封闭□　检测试剂，其中包⌒含分离、扩增和检 测所需的所有成分。测试条的硬质塑料组件内装有冻干试剂。测 试条的软质塑料部分含有多个囊泡，在其中进行各个反应步骤。 

产品结构如下图所示。

用户将样本加载到测试条中，随后将测●试条放入 FilmArray 系统，由仪器自动进行以下操作及检测：

 1.核酸纯化：核酸纯化发生在测试条的前三个反应区。样本 通过瓷珠进行机械研磨破碎，并配合相应化★学试剂通过磁珠技术 进行样本中核酸的捕获、洗★涤和洗脱释放。

 2.逆转录和第 1 轮多重 PCR：测试条检测的部分病原体属于 RNA病毒，因此在扩增前需运行逆转录步骤将病毒RNA转化为 cDNA。纯化后的核酸溶液与预热的预混试√剂混合以启动∞逆转录 步骤和随后的多重PCR反应，第1阶段PCR的反应体系中包含数十 对引物，多个PCR反应同时在一个反应体系中进行，用于富集样 本中存在的病原体核酸片断。

 3.第 2 轮巢氏 PCR：第 1 阶段PCR反应的产物经稀释后与含≡ 有DNA结合染料♀的第二轮▓PCR试剂混合。将该混合溶液分配到第2阶段PCR的102孔阵列当中。该阵列的各个孔位中已包含用于不 同病原体检测的引物（每种在不同的孔位▼中重复三次）和阳性质 控模Ψ板材料，用于检测各种待测病原体的特定核酸序列。第2阶 段PCR反应使用的巢式引物结合在第1阶段多重PCR反应特异性产 物内部，提高了反应的灵敏度和特异性。

4. DNA 熔解曲线分析：在第2阶段PCR反应之后，系统缓慢 升高温度并监测和分析第2阶段PCR反应阵列㊣中每个孔的荧光来 生成熔解曲线。特定PCR产物解链时的温度（熔解温度或 Tm） 恒定且可预测，FilmArray 软件自动】评估每个检测病原体在三个 重复孔中的数据来报告结¤果。

二、临床前№研究概述 

（一）主要原材料 

1.主要原材料的选择 本产品的主要原材料包括：DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTPs、 引物等。引物由申请人设计并生产，其他主要原材料均购自外部 供应商。申请人选择有资质的供应商提供⊙的原料，通过功能性试 验，确定了原材料的适用性，制定了各主要原材料的质量标准并 经检验合格。 

2.企业参考品和质控品设置情况 每个检测ω试剂均包含两个质控品：RNA 过程质控品和 PCR2 质控，在每次检测中随样本运行。RNA 过程质控品为真实样本， 即纯化的粟酒裂殖酵母。酵母∞菌为冻干形态，在装载样本后得以 溶解，并经历检测过程★的各个阶段，包括裂解、核酸纯化、逆转录、第 1 轮 PCR、稀释、第 2 轮 PCR 和熔解曲线分析。阳性结果 表示测试条中的所有步骤均执行成功。PCR2 质控由一对退火的 互补寡核〇苷酸组成，在产品◣生产中与其他引物一起添加在阵列中， 参与 PCR2 扩增反应，用于确认 PCR2 扩增步骤中阵列填充和◆荧 光检测的〓正确性。 企业内部参考品包括阳性参考品和阴性参考品。阳性质控品 由涵盖检测范围内↑所有病原体不同亚型的混合物组成。阴性参考 品用于确保测试条未出现因污】染或非特异性扩增而引起的非预期 的阳性结果。

 （二）生产工艺及反应体系研究

 申请人通过对试剂主要生产工艺如冻干工艺的研△究，确定了 最佳生产工艺。申请人对反应体系中样本量、引物浓度、DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTPs、离子的浓度以及逆转录的时间及温 度、PCR1 和 PCR2 的退火延伸时间及温度、循环数的选择等进 行优化，并通过∑　验证最终确定了最佳反应体系。 

（三）分析性能评估

 本产品分析性能评估内容包括最低检出限、包容性、分析特 异性、精密度、干扰物质和竞争性抑制等。申请人提交了有效运 行 的 质 量 体 系 下 生 产 的 三 批 产 品 在 适 用 机 型 FilmArray、 FilmArray 2.0 和 FilmArray Torch 上进行了性能评估。

1.最低检出限 

通过△对含有已知浓度的一种至五个微生物（细菌、病毒和酵 母菌）的系列稀释样本进行检测，对本产品的检出限进行预估。 

通过对含有预估检出限浓度分析物的样本进行 20 次重复检测， 来确认检出①限。如果在 20 次重复检测中至少 19 次为阳性 (19/20=95%)，则←可确认检出限。14 种病原体的检出限数据如下。

微生物	菌种/分离株	最低检出限
细菌
大肠埃希菌 K1 株	大肠埃希菌 K1，菌株 C5 [Bort]， O18ac:K1:H7 型 ATCC 700973	1 × 103 CFU/mL
流感】嗜血杆 菌	流感嗜血◣杆菌，菌株 AMC 36-A-1 [572]，b 型，生物型 I ATCC 10211	1 × 103 CFU/mL
流感嗜血杆菌，菌株 AMC 36-A-1 [572]，b 型，生物型 I ATCC 10211	单核细胞增生李斯特菌，菌株 1071/53，4b 型 ATCC 13932	1 × 103 CFU/mL
脑膜炎奈瑟 菌（有荚 膜）	脑膜炎奈瑟菌，菌株 M-1574 [199/W135] ATCC 43744	100 CFU/mL
无乳链球◤菌	无乳链球菌，模式菌株，G19，B 群 ATCC 13813	1 × 103 CFU/mL
肺炎链球菌	肺炎链球菌，菌株 SV 1，血清型 1 ATCC 33400	100 个细胞/mL
病毒
巨细胞病毒	巨细胞病毒，菌株 AD-169 Zeptometrix 0810003CF	100 TCID50/mL
肠道病毒 （A-D 属）	柯萨〓奇病毒 A6，A 属，菌株 Gdula ATCC VR-1801	50 TCID50/mL
	柯萨√奇病毒＠ A9，B 属 Zeptometrix 0810017CF	5 TCID50/mL
	柯萨奇病毒 A9，B 属 Zeptometrix 0810017CF	5 TCID50/mL
	EV 70，D 属，菌株 J670/71 ATCC VR-836	50 TCID50/mL
单纯疱疹病毒 1 型	单纯疱疹病毒 1 型，菌株 MacIntyre Zeptometrix 0810005CF	250 TCID50/mL
单纯疱疹病毒 2 型	单纯疱疹病毒 1 型，菌株 MacIntyre Zeptometrix 0810005CF	50 TCID50/mL
人疱疹病毒 6 型	HHV-6A，菌株 U1102 NCPV 0003121v	1 × 104 拷贝数 /mL
	HHV-6B，菌株 HST NCPV 0006111v	1 × 104 拷贝数 /mL
人双埃可病毒	人双埃可病毒，3 型 Zeptometrix 0810147CF	500 TCID50/mL
水痘-带状疱 疹病毒	水痘-带状疱疹病毒，菌株 Ellen Zeptometrix 0810171CF	0.10 TCID50/mL
酵母菌
新型隐球菌 （新生/格 特）	新生隐球菌，格鲁比变种，模式菌 株，H99 [H99JP, NYSD 1649] ATCC 208821	100 CFU/mL
	格特隐球菌，菌株 A6MR38， AFLP6C，VGIIc ATCC MYA-4877	100 CFU/mL

2.包容性 

     选择能够代表测试条包容性的 101 个分离∞株进行检测，所选 分离株能够代表病原体相关的种属、亚种或血清型，在接近检出 限浓度的水平〗进行检测。结果显示测试条能正确检出所有分离株。 同时对本产品可以检测却无法进行实验测试的不常见的菌株或血 清型进行了生物信息学分析以预测其反应性，未观察到任何漏检 情形。